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平板克隆形成实验

平板克隆形成实验

简要描述:
平板克隆形成实验可以检测贴壁细胞的克隆形成能力。

更新时间:2021-01-19

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厂商性质:其他

平板克隆形成实验可以检测贴壁细胞的克隆形成能力,克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。一般细胞在体外增殖六代以 上,其后代形成的细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来,含有50个以上细胞大小在0.3-1mm之间。通过克隆形成可检测各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。

平板克隆形成实验基本步骤: 

1.取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞并把细胞县浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中衡用。

2.将细胞县液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种合10mL 37"C预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37C、5% CO2及饱和温度的细胞培养箱中培养2-3周。

3.经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定细胞5ml固定15分钟。然后安固定液加适量GIMSA应用染色液染10-30分钟然后用流水缓慢洗去染色源,空气干燥。

4.将平皿倒置并叠加一张带网格的适明胶片,用肉眼直接计数克隆或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数,再计算克隆形成率,克隆形成率=克隆数/接种细胞数。

服务流程:

1)项目方案的确定,包括目的细胞、 细胞处理方式及处理时间等;

2)细胞培养;

3)克隆形成实验;

4)克隆形成实验图片及实验报告。

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