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酶联免疫吸附剂测定

酶联免疫吸附剂测定

简要描述:
酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成

更新时间:2021-03-25

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厂商性质:其他

实验过程

1)标准品的稀释与加样:标准品按照说明书稀释好五个梯度,各个梯度每孔加样量都为50μL

2)加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL,然后再加待测样品10μL。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;

3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30min

4)配液洗涤:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用;小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30sec后弃去,如此重复5次,拍干;

5)加酶:每孔加入酶标试剂50μL,空白孔除外;

6)温育:用封板膜封板后置37℃温育30min

7)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30sec后弃去,如此重复5次,拍干;

8)显色:每孔先加入显色剂A50μL,再加入显色剂B50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15min

9)终止:每孔加终止液50μL,终止反应;

10)测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15min以内进行。

计算

以标准物的浓度为坐标,OD值为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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